1. Streptococcus pyogenes (Gr.A) ID

1) Bacitracin Sensitivity Test

⑴ 목적 : β-용혈 Colony중 Streptococcus Gr.A 동정

⑵ 방법 : Lawning to strain on BAP → Dropping Bacitracin disk → 37℃/24시간 Incubation → 관찰

⑶ 결과

① 감수성 : 약 13㎜이상의 억제대 형성

② 내성 : 억제대 형성 없다

2) SXT (Sulfamethoxazole Tremethoprim) Sensitivity Test

⑴ 목적 : β-용혈 Colony중 Bacitracin에 감수성, SXT에 내성인 상관관계 확인으로 Streptococcus Gr.A와 Gr.B 동정

⑵ 방법 : Lawning to strain on BAP → Dropping SXT disk → 37℃/24시간 Incubation → 관찰

⑶ 결과

2. Streptococcus agalactiae (Gr.B) ID

1) CAMP Test

⑴ 목적 : β-용혈 Colony중 CAMP Factor 생성 균주는 β-lysin(toxin)을 생성하는 S.aureus와 교차접종시 그 부위에 상승된 용혈현상이 나타난다 이것으로 Streptococcus Gr.B 동정

⑵ 방법 : β-용혈 Colony 횡축도말 on BAP → β-lysin S.aureus 종축도말 → 37℃/24시간 Incubation → 관찰

⑶ 결과

① 양성 : 교차 접종부위에 상승된 용혈 현상 관찰 (Streptococcus Gr.B)

② 음성 : 교차 접종부위에 상승된 용혈 현상 없다 (Without β-용혈 Streptococcus)

2) Sodium hippurate Test

⑴ 목적 : β-용혈 Colony중 Hippurate hydrolase생성 균주는 Sod. hippurate를 가수분해 하여 Benzoate와 Glycine을 생성 이것으로 Streptococcus Gr.B 동정

⑵ 방법 A : Benzoate 검출

① 과정 : β-용혈 Colony를 Sod. hippurate Broth에 접종 → 37℃/24시간 Incubation → Adding to

12% FeCl3 → Mix → 10분후 관찰

② 결과 : * 양성 - 갈색 침전

* 음성 - Clear amber (엷은 호박색)

⑶ 방법 B : Glycine Test

① 과정 : β-용혈 Colony를 Sod. hippurate Broth에 접종 →37℃/24시간 Incubation → Adding to

3.5% Ninhydrin 0.2㎖ → Mix → 관찰

② 결과 : * 양성 - 자색

* 음성 - 무색

⑷ 방법 C : Wood lamp Test

① 과정 : β-용혈 Colony를 Sod. hippurate Broth에 접종 → 37℃/24시간 Incubation → Adding to

1% Uranium Acetate → Mix → Wood lamp하에서 관찰

② 결과 : * 양성 - 분홍빛 형광

* 음성 - 형광 없다

3. Streptococcus faecalis (Gr.D) ID

1) BEA (Bile Esculin Hydrolysis Agar) Test

⑴ 목적 : Bile Esculin Hydrolase생성 균주는 Bile Esculin을 가수분해 하여 Glucoside와 Esculetin을 생성

이것으로 Streptococcus Gr.D 동정

⑵ 방법 A : Broth Method

① 과정 : Bile Esculin Broth에 균 접종 → 37℃/24시간 Incubation → 0.1% Ferric ammonium citrate 3～4 dropping → 관찰

② 결과 : * 양성 - Black

* 음성 - Yellow (원 배지색)

⑶ 방법 B : Agar slant Method

① 과정 : Bile Esculin Agar에 균 접종 → 37℃/24시간 Incubation → 관찰

② 결과 : * 양성 - Black

* 음성 - Crime color (원 배지색)

2) 6.5% NaCl Tolerance Test

⑴ 목적 : Streptococcus Gr.D로 판명된 것 중 6.5%첨가 배지에서 Growth여부로 Enterococcus와 Non-Enterococcus 동정

⑵ 방법 : 6.5% NaCl첨가 배지에 균 접종 → 37℃/24시간 Incubation → 관찰

⑶ 결과

① 양성 : Turbid (Enterococcus)

② 음성 : Clear (Non-Enterococcus)

4. Streptococcus pneumoniae ID

1) Optochin Sensitivity Test

⑴ 목적 : α-용혈 Colony중 Optochin에 감수성 여부로 S. pneumoniae 동정

⑵ 방법 : Lawning to strain on BAP → Dropping Optochin disk → 37℃/24시간 Incubation → 관찰

⑶ 결과

① 감수성 : 15～30㎜의 억제대 형성 (S. pneumoniae)

② 내성 : 13㎜이하의 억제대 (Bile Solubility Test 실시)

2) Bile Solubility Test

⑴ 목적 : α-용혈 Colony중 Bile salt가 있으면 자가용해효소를 생성하는 것이 있다 이것으로 S. pneumoniae 동정

⑵ 방법 : Tube에 균 부유액을 넣는다 → 10% Bile juice (OXgall) 2～3 Dropping → 37℃/1～3시간 Incubation → 약 15분 간격으로 용균 관찰

⑶ 결과

① 양성 : Clear - 용균 (S. pneumoniae)

② 음성 : Turbid - 비용균 (다른 α-용혈 균주)

※ Bile 성분은 산성에서 자연 응고 침전되므로 0.1N NaOH로 균 부유액을 중화하여 사용한다

3) Capsule Swelling Test

⑴ 목적 : α-용혈 Colony중 Type specific antiserum에 Capsule이 팽창되는 것의 확인으로 S. pneumoniae 동정

⑵ 방법 : α-용혈 Colony + Type specific antiserum 1 drop → 1～3% Methylene blue 1 drop → Mix

→ Cover glass를 덮어 검경

⑶ 결과

① 양성 : Capsule swelling (1시간이내)

② 음성 : No capsule swelling

5. Biochemical Properties     

6. 대사산물

  1) 효소

     ⑴ Streptokinase(Fibrinolysin) : A, C, G군의 균이생성, Plasminogen을 활성화하여 Plasmin으로 하여

                                   Fibrin를 용해한다

     ⑵ Hyaluronidase : 주로 A, C군에서 생성, 조직간물질인 Hyaluronic acid를 가수분해하여 병소확산에

                       기여한다

  2) 독소

     ⑴ Hemolysin(용혈소)

        ① Streptolysin S : 세포 결합성 용혈독, A군에서만 생성, 열에 불안정, 산소에 안정, 항원성 없다

        ② Streptolysin O : A, C, G군에서 생성, 열에 안정, 산소에 불안정, 항원성 강하다

     ⑵ Erythrogenic toxin(피부 발적독소) : 성홍열 환자의 발적을 일으키는 원인 독소, A군에 의해 생성, 내열성

                                           60℃ 수시간 가열에도 파괴되지 않으나 96℃ 45분이면 완전 파괴

        ① Dick test : 성홍열 정제독소를 5,000배 희석한 것 0.1㎖을 피내주사 24시간 후 직경이 10㎜이상

                      발적침윤 일어나면 양성

        ② 쇠퇴현상(Schultz-Charlton, Branching phenomenon) : 성홍열 발적부위에 회복기 환자의 혈청 0.1㎖를 접종시 발적독소가                                                                  주사부위에서만 중화되어 발적이 소실되는 상태